| USDA方法
黄曲霉毒素检测试剂盒
本试剂盒采用竞争性直接酶联免疫吸附实验（CD-ELISA）, 用于下列农产品中较低含量黄曲霉毒素的定量检测：玉米，玉米粉，玉米黄浆，玉米/酱豆混合物，小麦，大米，高梁，酱豆，棉籽，棉籽食品，花生，花生油及混合饲料。
检测步骤
测定前样品须经提取处理（提供样品提取试剂盒）
1 向混合孔中加入100ul酶结合物；
2 向混合孔中分别加入100ul对照和样品；
3混合，转移100ul到抗体包被的微孔中，温育10分钟；
4倒出抗体包被微孔中的液体；
5用去离子水充分洗涤抗体包被微孔；
6在纸巾上将液体全部拍出；
7用多通道的微量移液器吸取100ul底物到抗体包被微孔中，温育5分钟；
8加入100ul终止液（1N硫酸溶液）到抗体包被微孔中；
9 用酶标仪（450nm）测量吸光度值，获得结果。
产品说明
测定时间： 20分钟（3分钟样品提取后）
抗体交叉反应： 总黄曲霉毒素（B1,B2,G1,G2）
产品类型： 24/48孔
线性范围： 定性（5，10，15，20，50ppb）
定量（1～8ppb；5-50ppb；5-320ppb）
认证机构： AOAC官方方法 编号：990.32(定性试剂盒)
USDA/GIPSA（定量试剂盒）
其它天然毒素ELISA试剂盒(AOAC或USDA认证)：
T-2毒素、呕吐毒素、伏马毒素、赭曲酶毒素、玉米烯酮及组胺检测
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天然毒素类定量检测 |
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黄曲霉毒素 |
48孔 |
2200 |
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DON |
48孔 |
2200 |
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伏马毒素 |
48孔 |
2200 |
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T-2毒素 |
48孔 |
2200 |
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玉米烯酮 |
48孔 |
2200 |
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赭曲霉毒素 |
48孔 |
2200 |
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组胺检测试剂盒 |
48孔 |
2400 |
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组胺提取试剂盒 |
48孔 |
1200 |
北京兰伯瑞生物技术有限责任公司
联系电话：010－87628350 87628537 87628660 67623257
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北京市丰台区成寿寺路31号3号楼1层 邮编：100078
开始检测前请仔细阅读说明书
Veratox Aflatoxin-HS黄曲霉毒素定量检测试剂盒
黄曲霉毒素高灵敏度的定量检测
冷藏于2-8℃，请勿冻存！
黄曲霉毒素
黄曲霉毒素被广泛地认为是现今已知最强的天然致癌物质。它与人类及动物的许多疾病存在着联系。它是许多作物上霉菌生长时产生的副产物。黄曲霉毒素的两种主要生产者是黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）。事实上，这两种曲霉在世界上的任何地方都可找到。虽然它们是土生的，但喜欢生长在营养丰富的植物种子上。它们的毒素产生于收获前的田地中或收获后的储存阶段。在上述情况下，由于害虫的侵害、失当的管理或环境的胁迫都会使这些曲霉侵入植物的种子。许多国外的市场经常检测黄曲霉毒素含量并拒绝接受含量超过2-10ppb的货物。由于检测的下限很低，跨国贸易的客商从中收益匪浅，因为这些国家经常将黄曲霉毒素的含量限定在10ppb以下。本试剂盒正是为满足欲检测更低含量黄曲霉毒素的客户之要求而设计的。
主要用途
本品采用直接竞争性酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测多种样品中的黄曲霉毒素含量：玉米，玉米粉，玉米黄浆，谷物面筋，高粱粉，生花生，熟花生，花生黄油，花生粉，爆米花，大米，小麦。
主要用户
本品是为质控人员和其他熟悉可能被黄曲霉毒素污染的食品及饲料的工作人员的使用而设计的。由于技术至关重要，操作者应该是直接或间接经本公司培训过之人员（受过本公司代表培训或其他受过此类培训之人的培训。）
检测原理
本检测方法是在微孔中进行的直接竞争性ELISA，可提供黄曲霉含量的准确结果（ppb级）。样品及对照中游离的黄曲霉毒素与酶标黄曲霉毒素竞争抗体上的结合位点。洗涤步骤之后，加入底物。底物与结合的酶作用，产生兰色。兰色越深，表明黄曲霉毒素的含量越低。检测的结果经微孔板读数仪读取吸光度值。用对照组的吸光度值绘制标准曲线，样品的吸光度值在曲线上作图，从而计算出黄曲霉毒素的准确含量。
储存条件
试剂盒冷藏于2-8℃（华氏35-46℉），在标示的有效期内可用。
提供的材料
1 微孔板，48孔
2 红色标示的混合孔，48孔
3 黄色标示的黄曲霉素对照，1.5ml，5瓶，浓度分别为0，1，2，4，8（见“警告”中关于操作甲醇溶液之须知）
4 兰色标示的酶标黄曲霉毒素（HRP标记），1瓶，7ml
5 绿色标示的K-Blue SubstrateTM底物溶液，1瓶，24ml
6 红色标示的终止溶液，1瓶，32ml
7 使用说明
未提供的必需品
1 提取材料（本公司提供此类试剂盒）
a ACS 级甲醇
b 去离子水或蒸馏水
c 量筒，250ml
d 容器，125ml
e Whatman #1滤纸，Neogen过滤器，或相当产品
f 漏斗
g 样品收集管
2 WaringTM高速混合器以及1L配套容器，或相当产品
3 Agri-Grind或Glen Disc Mill研磨机，或相当产品
4 天平，量程5-25g
5 酶标仪，可读波长包含650nm（可由本公司购得）
6 微量移液器，12通道（可由本公司购得）
7 MLATM移液器，或相当产品及吸头（可由本公司购得）
8 纸巾，KayDry纸或其他吸水材料
9 塑料桶，做废液储槽，1/2加仑
10 微孔板支架（可由本公司购得）
11 计时器（可由本公司购得）
12 Sharpie或其他防水记号笔（可由本公司购得）
13 塑料挤压式洗瓶，250ml
14 可用于12通道微量移液器的试剂槽，2只（可由本公司购得）
15 去离子水或蒸馏水
警告
1 甲醇易燃，应保持容器密封，并远离热源，火星，明火及烟火等。咽下或吸入蒸汽都是有毒的。应避免与皮肤的接触。
2 不用时，应将试剂盒冷藏于2-8℃（华氏35-46℉）。
3 不能使用过期的试剂盒中的组件。
4 序列号不同的试剂盒中的组件，请勿混用。
5 每一次试验，使用的微孔数请不要超过24个。
6 按照正确的移液技术，包括正确的灌注吸头的方法。
7 不合适的温育时间会产生不准确的结果。
8 使用前，应使试剂盒的温度升高至室温18-30℃（华氏64-86℉）。
9 应避免将试剂盒过长时间的放于室温下。
10 不能冷冻试剂盒。
11 认真处理所有使用过的液体，包括样品提取液，及实验室中用具。时刻带手套及穿戴其他保护性的工作服。
12 为避免交叉污染，每一个样品都使用新的移液器吸头及玻璃器皿，不同的样品间的操作，应充分祛除毒素并洗涤玻璃容器。
13 样品提取液在测试之前的酸度应该在6-8。过酸或过碱都应该对样品的pH值进行调整。关于这方面的信息，请与当地公司代表联系或向本公司技术服务部联系。
操作注意事项
底物： K-Blue底物是预先活化过的，即可使用。根据下表确定进行试验所需的试剂体积。量取所需之体积。不用时，底物应避光保存。
请勿将（已取出但）未用完之底物放回原瓶！
板条数 样品数 底物体积（ml）
1 1-7 3.0
2 8-19 4.0
样品制备及提取
应按照认可的取样技术进行取样。提取前，应研磨粉碎并彻底混合均匀。将样品储存于2-8℃（华氏35-46℉）以备后用。注意：如使用本公司Agri-Screen提取试剂盒，请按照试剂盒中的说明书进行操作。如果自己动手配制提取溶液，请按照下述步骤进行：
1 配制70%甲醇，方法是将7份ACS级纯度的甲醇与3份蒸馏水或去离子水混合均匀即可。
2 获得具有代表性的样品。将所有的样品研磨粉碎，使至少75%研碎的粉末能够通过20目筛，粉末的细度大致与速溶细咖啡相当。
3 在高速混合器内，用125ml 70%甲醇与25g磨碎的样品混合2min至均匀。也可以将5g样品与25ml 70%甲醇溶液混合，然后剧烈摇动3min。
4 将至少5ml溶液滤过Whatman#1滤纸（或Neogen过滤注射器），收集滤液作为样品。
5 样品不必做进一步的处理即可用于检测。
操作步骤
使用前请将所有试剂升温至室温（18-30℃，或华氏64-86℉）。
1 取出与样品个数相同数目的红色标记的混合微孔，另取出5个用于对照，置于架子上。
2 取出相同数目的抗体包被过的微孔（样品个数+5个对照）。将其余的马上放回装有干燥剂的锡箔袋中。折下袋子末端并用带子扎紧以保护抗体。将板条的一端标记上“1”，按标记端朝左的方向将板条放置在架子上。
3 使用前，用涡旋试剂瓶的方法使试剂都混合均匀。
4 从兰色标示的试剂瓶中取出100ul酶标黄曲霉毒素，分别加入到红色的混合孔中。
5 用新的吸头吸取标准品和样品100ul到红色标示的混合孔中。示例如下：
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0 |
1 |
2 |
4 |
8 |
S1 |
S2 |
S3 |
S4 |
S5 |
S6 |
S7 Strip1 |
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S8 |
S9 |
S10 |
S11 |
S12 |
S13 |
S14 |
S15 |
S16 |
S17 |
S18 |
S19 Strip2 |
6 用12通道微量移液器混合微空中的溶液，方法是吸入并打出3次。转移100ul到抗体包被的微孔中。用使微孔板在平面上前后滑动10-20s的方法使微孔中的液体混合均匀，注意不可使液体溅出。室温下（18-30℃，或华氏64-86℉）温育10min。丢弃混合孔。
7 用洗瓶或水流，将去离子水或蒸馏水灌注抗体包被微孔，然后使其流出。重复此步骤5次，然后颠倒微孔板，用纸巾吸水，直到所有残留的水全部流出为止。
8 从绿色的底物溶液试剂瓶中吸出所需体积的底物溶液于一绿色的试剂槽中，用新的吸头吸取100ul底物溶液加入到各微孔中，并用前后滑动微孔板10-20s的方法使微孔内的溶液混合均匀。温育10min。弃去剩下的底物溶液并用水清洗试剂槽。
9 从红色试剂瓶中吸取红色的终止液，体积与第8步骤中底物的体积相同，加入到试剂槽中。用新的吸头向每个微孔加入终止液100ul，用相同的前后移动的方法混合均匀。丢掉吸头。
10 用干布或毛巾擦拭微孔板底部并用酶标仪读取650nm处的吸光度值。应消除气泡，因为它们会影响吸光度的数值。应在检测结束后的20min内读取结果。用本公司Log/Logit软件计算结果。关于不使用软件而进行手工计算获得结果的用户，请与本公司技术服务人员联系获取详细的信息。
复检
如果在没有检测过的样品中出现阳性结果，应该用其他认可的方法进行确认以后在采取相应的措施。
性能特点
检测下限：0.5 ppb（由10个无黄曲霉毒素样品的平均值加上2个标准差得到）
定量下限：1.0 ppb（定义为能可靠地检测黄曲霉毒素时，测标准曲线上所示的最低浓度）
线形范围：1-8 ppb（对于含量超过8ppb的样品，与本公司技术服务部联系咨询样品稀释方面的指导。）
确认介质：12种 玉米，玉米粉，玉米黄浆，谷物面筋，高粱粉，生花生，熟花生，花生黄油，花生粉，爆米花，大米，小麦
客户服务
在上午8：00~下午7：00（东部时间），拨打800/234-5333（美国/加拿大）或517/372-9200，向Neogen 公司销售代表或技术服务部咨询可获得帮助，免费进行检测试剂盒使用方法的技术培训。
保险
Neogen 公司没有做任何形式的担保，表述的或暗示的，除非其用于生产的原料质量达到了公司标准。如果任何一种材料有缺陷，Neogen 公司将替换产品。购买者将承担所有因使用该产品带来的风险及责任。本产品没有销售保险，或可将本产品应用于任何目的的合适性。Neogen 公司对这些损失不负有任何责任（包括直接损失及后果性损失），或由于使用了本公司产品所导致的直接或间接的开支。
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V-AflaHS-1098 |
