产品号：#8451
测试前请仔细阅读本说明
 ALERTR○R
蛋过敏原筛选测试盒
在2—8℃下冷藏—不得冻结
蛋过敏原
食物过敏原是食物中能使敏感个体产生免疫响应的蛋白质。一旦摄入该食物，食物过敏原就会产生许多反应，从严重的荨麻疹和发痒到过敏毒素反应。过敏毒素反应是一种严重的过敏反应，会引起呕吐、腹泻、呼吸困难、口舌肿大、血压快速降低。
统计数字指出，2—3%的成年人和5—8%的儿童对食物过敏原有不同程度的敏感。现在知道单只美国就有600万人患食物过敏症，而蛋过敏症也是最流行的一种。
食品制造厂为了保护食物过敏症患者，在其食品上加明显的标签，列出食品组分表，残余蛋蛋白质的测试可保证食品制造厂不让标签未标明的成分—可能有危险的成分进入食品。
预期用途
Alert蛋过敏原测试盒可用于定性鉴别诸如pasta、拌色拉的调料、饼干和冰琪琳等食物和环境表面的未加工和经热加工的蛋蛋白质。
预期用户
本测试盒可供质检人员和其它熟知可能被蛋或蛋制品污染的食物的人员使用。因本项技术极其重要，操作人员必须经过Neogen公司代理人或已成功地通过Neogen公司培训的人员的培训。
方法原理
Alert蛋过敏原测试盒是一种夹心式酶联免疫吸附剂方法（S—ELISA）。将试样与热缓冲盐溶液（PBS）混合以提取试样中蛋蛋白质。取部分提取液加到包被了抗体的微孔（吸附抗体）中，温育时蛋蛋白质与抗体结合。未结合的蛋蛋白质被冲洗掉，再加入酶标记的第二种抗体（检测抗体），检测抗体与已结合的蛋蛋白质结合，经第二次冲洗后，加入底物，由于有结合的检测抗体，显出颜色，加红色终止试剂，观察溶液的颜色。
保存条件
本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
已提供的材料
1. 24个包被了抗体的微孔。
2. 1个黄色标签的装有2毫升5ppm蛋的对照物滴瓶。
3. 1个兰色标签的装有3毫升酶标记的抗体结合物滴瓶。
4. 1个绿色标签的装有3毫升K•Blue○R底物溶液的滴瓶。
5. 1个红色标签的装有3毫升红色终止液的滴瓶。
6. 20个没有标签的带尖咀的空试样滴瓶。
7. 3袋10mMPBS干粉提取剂，每袋可制备1升提取液。
8. 1个装有40毫升PBS非离子活化剂洗涤缓冲浓缩液广口瓶，可制备1升洗涤缓冲液。
9. 装在试样杯中的50克提取添加剂。
10. 1个塑料勺，可装1克提取添加剂。
11. 使用说明书。
未提供的必需物品
1. 带250毫升容器的高速搅拌器。
2. 可称量5±0.1克的天平（Neogen公司产品号为#9427）。
3. 水浴、加热板或能保持60℃±1℃的相当热源。
4. 温度计。
5. Whatman #4滤纸或相当品。
6. 2个1升瓶，用于制备洗涤液和提取液（Neogen公司产品号为#9472）。
7. 纸巾或相当的吸水材料。
8. 微孔支架（Neogen公司产品号为#9402）。
9. 防水标记。
10. 洗涤瓶（Neogen公司产品号为#9400）。
11. 蒸馏水或去离子水。
12. 定时器（Neogen公司产品号为#9426）。
13. 可计量125毫升的量杯（Neogen公司产品号为#9368）。
注意事项
1. 检测蛋蛋白质的试样应与检测其他食物过敏原（例如花生和牛奶残余物）的试样分开单独提取，因为每种检测所用的提取添加剂都是根据所测的食物过敏原专门设计。
2. Alert蛋过敏原测试盒包含有如对照物和提取试剂等，它可能适用于以下一种或多种过敏性物质：牛奶、蛋蛋白、花生蛋白或大豆蛋白。如果对任何一种成分都过敏，应小心使用。
3. 检测环境应当干净无尘。
4. 测试盒不使用时应在2—8℃（35—46°F）下冷藏。
5. 不要使用过期的测试盒。
6. 不要把不同测试盒中的试剂混合使用。
7. 一次同时最多操作6个微孔。
8. 使用前应使测试盒恢复达到室温（18—30℃）。
9. 只可使用规定的温育时间，否则结果会不准确。
10. 避免测试盒在室温下长时间放置。
11. 不得让测试盒冻结。
过程提示
1. 提取液。提取液的制备：将1袋提取剂(10mMPBS)倒入1升pH为7.4的蒸馏水或去离子水中，摇动混匀。加盖，于室温下（18—30℃）保存。
2. 洗涤缓冲液。洗涤缓冲液的制备：将全部洗涤缓冲浓缩液倒入1升空瓶中。用蒸馏水或去离子水冲洗浓缩液的容器，也倒入1升瓶中，以保证全部浓缩液都转移出来。加入蒸馏水或去离子水至1升，剧烈摇动，以保证彻底混合。加盖于2—8℃下冷藏。
注：测试盒全部用完后，未用完的提取液和洗涤缓冲液就报废。
3．抗体微孔：微孔不使用时应密封在箔袋中，要完成提取过程开始测试时才取出微孔。
试样制备和提取
待测样品应按公认的采样技术采集（参见Neogen公司食品过敏原监
测手册）。试样应研磨并充分混合，然后才可进行提取过程。注：关于环境采样，可使用Neogen公司的Alert过敏原环境采样盒。
1. 按过程提示中叙述的方法制备提取液。
2. 将提取液预热到60℃。
3. 取得有代表性的试样。如果试样粒度过大，应研磨至极细粒度。
4. 取5克经研磨的试样或5毫升液体试样加到250毫升塑料提取瓶中。
5. 在瓶中加入一平匙蛋提取添加剂（不得使用另一测试盒中的提取添加剂）。
6. 加125毫升60℃提取液到提取瓶中，高速搅拌2分钟。
7. 静置5分钟。注：在很少的情况下，为得到无悬浮物的上清液可能要过滤：至少取5毫升用Whatman#4滤纸过滤，或于14000rpm离心5分钟。
8. 用一根可任意处理的移液管吸取约1毫升上清液（上层液态提取物）移入试样滴瓶中，然后在瓶上贴标签并安一个滴嘴。
9. 让试样冷却至室温（至少15分钟），即可开始测试过程。
测试过程
测试前应将所有的试剂恢复至室温（18～30℃）。
1. 从箔袋中为每个待测试样取出1个微孔，另加1个对照物微孔，将其放在微孔支架上。
2. 摇晃试剂滴瓶使每种试剂混合，以备使用。
3. 从黄色标签的对照物滴瓶中滴3滴到第1个微孔中。按下图微孔板中所示，从每种试样提取物的滴瓶中滴加3滴到各自的微孔中。将微孔支架在平面上前后滑动混合20秒钟。
对照物  S1   S2   S3   S4   S5
4. 在室温下（18—30℃）温育10分钟。
5. 抖出各微孔中的溶液。用装满洗涤缓冲液的洗涤瓶，将每个微孔灌满，再摇动倒出。重复10次。将微孔倒转，排除剩余的洗涤缓冲液，使劲抖出微孔中液体，让它流在吸水巾上。
6. 从兰色标签的酶标记结合物的滴瓶中滴3滴到每个微孔中。将微孔支架在平面上前后滑动混合20秒钟。
7. 在室温（18—30℃）下温育10分钟。
8. 抖掉微孔内的溶液。用装满洗涤缓冲液的洗涤瓶，装满每个微孔，再抖掉。重复10次。将微孔倒置以排除剩余的洗涤缓冲瓶，并用劲抖出微孔中液体，流在吸水巾上。
9. 从绿色标签的底物滴瓶中滴3滴到每个微孔中，将微孔支架在平面上前后滑动混合20秒钟。
10. 在室温下温育（18—30℃）10分钟。
11. 从红色标签的红色终止液滴瓶中滴3滴到每个微孔中。将微孔支架在平面上前后滑动混合20秒钟。现在已获得结果只待解释。
结果的解释
用肉眼比较试样微孔的颜色和对照物微孔的颜色。如果试样微孔的兰色比对照物微孔的兰色深，则结果为阳性，表明试样中的蛋蛋白质污染含量高于5ppm。如果试样微孔的兰色比对照物微孔的浅或更深的红色，则试样中的蛋污染含量低于5ppm。
可供替代的方法：首先取下微孔的底座，带650纳米滤光器的微孔读出器读出各微孔的透光率。如果试样微孔的光密度（OD）高于对照物微孔，则试样中蛋污染含量大于5ppm。如果试样微孔的光密度低于对照物微孔，则试样中的蛋污染含量低于5ppm。
本测试盒的优点
操作简单
•直接目视比色。
•无需专门培训。
•无需复杂的化学提取过程。
•提供了测试样品所必需的所有试剂。
•快速—30分内可获得结果。
准确
•可检测未经加工和经热加工的蛋蛋白质。
•样品与已知浓度的标准对照液对照。
•结果与Nebrask食品科学系的结果一致。
支持
•24小时技术支持。
•内部研发人员。

NEOGEN可提供的试剂盒
天然毒素
•黄曲霉毒素，DON，赭曲霉毒素，玉米烯酮，T—2毒素，伏马毒素，组胺
食源性细菌
•E.coli O157：H7，沙门氏菌，李斯特菌，单核增生李斯特菌，弯曲杆菌，金黄色葡萄球菌，弧菌
卫生检测
•ATP，酵母菌和霉菌，总平板计数，普通E.coli和总大肠杆菌，蛋白残留
食物过敏物
•花生，牛奶，蛋，杏
转基因
•Cry9C（StarLink○R），CP4（Roundup Ready○R）
反刍类副产品
•肉骨粉，饲料